保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定

摘要：本文建立了保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的HPLC测定方法。参照国标GB/T 5009.197-2003中色谱条件并进行优化，采用色谱柱ShimNex CS C18（4.6*150mm，5µm）分析保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因等5种组分，5个化合物峰形良好，分离度大于1.5，满足日常检测需求。此方法可为保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因等5组分的HPLC分析提供参考。
关键词：保健食品 盐酸硫胺素 盐酸吡哆醇 烟酸 烟酰胺 咖啡因 ShimNex CS C18 HPLC

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-20AD 高效液相色谱仪；
色谱柱：ShimNex CS C18 (4.6×150mm，5μm；P/N：380-01230-02)；
纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+60L水箱 +取水器）；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE 针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS 认证样品瓶 LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 混合对照品溶液的制备

分别准确称取5种组分标准品适量，加水溶解并稀释至1.0 mg/mL的单标溶液，然后分别量取各组分单标溶液适量，加甲醇-水-磷酸（100：400：0.5）溶液稀释得到如下浓度的混合对照品溶液：盐酸硫胺素和盐酸吡哆醇0.05 mg/mL，烟酸和烟酰胺0.1 mg/mL，咖啡因浓度为0.5 mg/mL，混匀，备用。

1.3 试样溶液的制备

取液体试样适量，过0.22 µm滤膜，备用。

1.4 分析条件

色谱柱：ShimNex CS C18 (4.6×150mm，5μm；P/N：380-01230-02)；
柱温：25°C
检测波长：280 nm（盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺咖啡因）/260nm（盐酸硫胺素）
流速：1.0mL/min
进样量：10µL
流动相：
1）盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因：
 A：癸烷磺酸钠溶液（1.22g→850mL）+乙腈+磷酸=850+150+1
 B：乙腈
 A：B=95：5
2）盐酸硫胺素： 硫酸月桂酯钠溶液（5g→530mL）+乙腈+磷酸=530+470+1

2 实验结果

按照上述色谱条件（1.4）进行采集，混合对照品溶液和试样溶液色谱图如下：
混合对照品溶液（280nm：盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因）

混合对照品溶液放大图（280nm：盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因）

试样溶液（280nm：盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因）

试样溶液放大图（280nm：盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因）

混合对照品溶液（260nm：盐酸硫胺素）

试样溶液（260nm：盐酸硫胺素）

重现性:

混合对照品溶液重现性

试样溶液重现性

3. 结论

本文建立了保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的HPLC测定方法。参照国标GB/T 5009.197-2003中色谱条件并进行优化，采用色谱柱ShimNex CS C18（4.6*150mm，5µm）分析保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因等5种组分，5个化合物峰形良好，分离度大于1.5，满足日常检测需求。此方法可为保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因等5组分的HPLC分析提供参考。