枸橼酸离子含量测定

摘要：本文建立了人凝血酶原复合物中枸橼酸离子含量测定的HPLC方法。参照2020版《中国药典》第三部方法，并对色谱条件进行优化，采用色谱柱Shim-pack Scepter C18-120分析枸橼酸离子，枸橼酸离子峰形良好，拖尾因子小于药典要求的1.4，满足《中国药典》需求。此方法可为枸橼酸离子含量测定提供参考。
关键词：枸橼酸离子 Shim-pack Scepter C18-120 HPLC
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-40D高效液相色谱仪；
色谱柱：Shim-pack Scepter C18-120（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-31020-06，S/N：117DA90121）；
纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱 + 取水器）；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC-MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 对照品溶液的制备

精密量取枸橼酸适量，用超纯水溶解并稀释，配制成浓度为5 mmol/L的溶液，作为对照品溶液。

1.3 供试品溶液的制备

取1 mL人凝血酶原复合物，加4 mL 1.5%磺基水杨酸溶液，混匀，室温放置2 h以上，3000 r/min离心10分钟，取上清液，作为供试品溶液。

1.4 分析条件

色谱柱：Shim-pack Scepter C18-120（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-31020-06，S/N：117DA90121）
柱温：40℃
检测波长：210 nm
流速：1.0 mL/min
进样量：20 µL
流动相：[18.2 mmol/L磷酸二氢钠溶液，0.1%异丙醇溶液（用磷酸调pH至2.0）]：乙腈= 97：3

2. 实验结果

按照上述色谱条件（1.4）进行采集，对照品溶液和供试品溶液色谱图如下：

对照品溶液

供试品溶液

重现性

供试品溶液重现性

3. 结论

本文建立了枸橼酸离子含量测定的HPLC方法。参照2020版《中国药典》第三部方法，并对色谱条件进行优化，采用色谱柱Shim-pack Scepter C18-120分析枸橼酸离子，枸橼酸离子峰形良好，拖尾因子小于1.4，满足《中国药典》需求。此方法可为枸橼酸离子含量测定提供参考。