UHPLC法分析带保护基团的亚磷酰胺单体

摘要：本文建立了带保护基团的亚磷酰胺单体N-苯甲酰基-5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-2'-O-甲基腺苷-3'-(2-氰基乙基-N,N-二异丙基)的UHPLC测定方法。采用色谱柱Shim-pack Scepter HD-C18、ShimNex UP C18分析此亚磷酰胺单体，结果显示，此亚磷酰胺单体的两个手性同分异构体色谱峰峰型良好，且2个化合物分离度大于1.5，满足分析要求。此方法可为带保护基的亚磷酰胺单体检测提供参考。
关键词：带保护基的亚磷酰胺单体 Shim-pack Scepter HD-C18 ShimNex UP C18 UHPLC
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-40BX3高效液相色谱仪；
色谱柱：ShimNex UP C18（1.8μm，2.1×100mm；P/N：380-01231-02）；
色谱柱：Shim-pack Scepter HD-C18（1.9μm，2.1×100mm；P/N：227-31026-05）；
纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱 + 取水器）；
SHIMSEN Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341）；
LC-MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 分析条件及实验结果

1.2.1 分析条件

色谱柱：ShimNex UP C18（1.8μm，2.1×100mm；P/N：380-01231-02）
柱温：17℃
检测波长：235nm
流速：0.3 mL/min
进样量：1 µL
流动相：A：10mM乙酸铵，B：乙腈；A：B=35：65

实验结果

按照上述色谱条件（1.2.1）进行采集，对照品溶液如下：
对照品溶液

1.2.2 分析条件

色谱柱：Shim-pack Scepter HD-C18（1.9μm，2.1×100mm；P/N：227-31026-05）
柱温：20℃
检测波长：235nm
流速：0.3 mL/min
进样量：1 µL
流动相：A：10mM乙酸铵（用氨水调节pH为9.0）：乙腈=50：50；B：10mM乙酸铵（用氨水调节pH为9.0）：乙腈=5：95
    A：B=70：30

实验结果

按照上述色谱条件（1.2.2）进行采集，对照品溶液如下：
对照品溶液

3. 结论

本文建立了带有保护基团的亚磷酰胺单体N-苯甲酰基-5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-2'-O-甲基腺苷-3'-(2-氰基乙基-N,N-二异丙基)的UHPLC测定方法。采用色谱柱Shim-pack Scepter HD-C18、ShimNex UP C18分析此亚磷酰胺单体，结果显示，此亚磷酰胺单体的两个手性同分异构体色谱峰峰型良好，且2个化合物分离度大于1.5，满足分析要求。此方法可为带保护基的亚磷酰胺单体检测提供参考。