特殊医学用途婴儿配方食品中维生素B6的测定

摘要：本文建立了特殊医学用途婴儿（乳蛋白深度水解）配方食品中维生素B6的HPLC测定方法。参照 新国标GB 5009.154-2023《食品中维生素B6的测定》中第三法色谱条件并进行优化，采用色谱柱ShimNex CS C18分析特殊医学用途婴儿（乳蛋白深度水解）配方食品中维生素B6，结果显示，吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺峰形对称，与相邻杂质峰基线分离，满足日常检测要求。此方法可为食品中维生素B6的检测提供参考。
关键词：食品 特殊医学用途婴儿配方食品 乳蛋白深度水解 维生素B6 吡哆醇 吡哆醛 吡哆胺 ShimNex CS C18 HPLC
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-20AD高效液相色谱仪；
色谱柱：ShimNex CS C18（5μm，4.6×150 mm；P/N：380-01230-02）；
纯水机： PR-FP-0120α-MT1（ + 60L 水箱 + 取水器）；
SHIMSEN Disc HPTFE 针式过滤器（ P/N： 380-00341）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 混合标准工作溶液的制备

分别准确称取盐酸吡哆醛、盐酸吡哆醇、盐酸吡哆胺标准品适量，加0.1mol/L盐酸溶液配制成每1 mL含1mg的溶液作为标准储备液；分别取吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺标准储备液适量，加流动相A制成每1 mL分别含吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺20 μg的混合标准中间溶液；取维生素B6混合标准中间溶液适量，加水制成每1 mL分别含吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺40 ng的混合标准工作溶液。

1.3 试样溶液的制备

称取试样2 g（精确至0.01 g）于150 mL锥形瓶中。加入25mL 45℃的水，混匀。静置10 min，冷却至室温。用0.1mol/L盐酸溶液调节上述试样溶液的pH至1.76，放置1min。再用0.1 mol/L氢氧化钠溶液调节试样溶液的pH至4.42。把上述锥形瓶放入超声波振荡器中，超声振荡约10 min。将试样溶液转移至50 mL容量瓶中，用水冲洗锥形瓶。洗液合并于50 mL容量瓶中，用水稀释至50 mL。另取50 mL锥形瓶，上面放入漏斗和滤纸，把稀释后的试样溶液倒入其中，自然过滤。滤液再经0.45 μm微孔滤膜过滤后转移1 mL至棕色进样瓶作为试样待测液。

1.4 分析条件

色谱柱：ShimNex CS C18（5 μm，4.6×150mm；P/N：380-01230-02）
柱温：30℃
检测波长：激发波长293nm，发射波长395nm
流速：1.0mL/min
进样量：20µL
流动相：A：庚烷磺酸钠与三乙胺混合溶液：称取庚烷磺酸钠2.0g，用950mL水溶解，准确加入4.0mL三乙胺，用冰乙酸调pH至3.07，然后转移至1000mL容量瓶中，并以超纯水稀释至刻度，经0.45μm微孔滤膜过滤。 B：甲醇
梯度程序如下：

2. 实验结果

按照上述色谱条件（1.4）进行采集，混合标准工作溶液和试样溶液色谱图如下：
混合标准工作溶液

试样溶液

重现性
标准溶液重现性

试样溶液重现性

3. 结论

本文建立了特殊医学用途婴儿（乳蛋白深度水解）配方食品中维生素B6的HPLC测定方法。参照新国标GB5009.154-2023《食品中维生素B6的测定》中第三法色谱条件并进行优化，采用色谱柱ShimNex CS C18分析特殊医学用途婴儿（乳蛋白深度水解）配方食品中维生素B6，结果显示，吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺峰形对称，与相邻杂质峰基线分离，满足日常检测要求。此方法可为食品中维生 素B6的检测提供参考。