食品（乳粉）中色氨酸的测定

2024年1月31日

摘要：本文建立了食品（乳粉）中色氨酸的HPLC测定方法。参照新国标GB5009.294-2023中色谱条件，采用色谱柱ShimNex CS C18分析食品（乳粉）中色氨酸，结果显示，L-色氨酸峰型对称，与相邻杂质峰基线分离，满足日常检测需求。此方法可为食品（乳粉）中色氨酸的检测提供参考。
关键词：食品乳粉色氨酸 ShimNex CS C18 HPLC

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-40D高效液相色谱仪；
色谱柱：ShimNex CS C18（5 μm，4.6×150mm；P/N：380-01230-02）；
纯水机： PR-FP-0120α-MT1（ + 60L 水箱 + 取水器）；
SHIMSEN Disc HPTFE 针式过滤器（ P/N： 380-00341）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 标准工作溶液配制

称取L-色氨酸标准品适量，用水溶解并稀释配制成100μg/mL标准中间溶液。分别准确吸取标准中间溶液20.0 μL和5.00mL于10mL容量瓶中，各加入2.40mL甲醇，加水定容至刻度，混匀。L-色氨酸标准工作溶液的质量浓度分别为0.200μg/mL和50.0μg/mL。

1.3 试样处理

准确称取试样0.2g（精确至0.001 g）于50mL螺纹带盖的离心管中，依次加入0.5mL蛋白酶溶液（称取0.05g灰色链霉菌蛋白酶，用Tris缓冲溶液（称取6.06gTris碱于1000mL烧杯中，加水500mL溶解，用1.0mol/L盐酸溶液调节溶液pH至8.5±0.05）溶解并定容至10 mL，使蛋白酶质量浓度为17.5 U/mL，临用现配）、3.0mLTris缓冲液、200μL甲醇，涡旋混匀后超声溶解，于50℃恒温培养箱中酶解16h。取出离心管，冷却至室温，加入12mL甲醇，用水将样品转移并定容至50mL容量瓶中，混匀，经0.22 μm有机相微孔滤膜过滤，滤液供液相色谱测定。

1.4 分析条件

色谱柱：ShimNex CS C18（5 μm，4.6×150mm；P/N：380-01230-02）
柱温：35℃
检测波长：PDA280nm
流速：0.8mL/min
进样量：5µL
流动相：A：称取0.77g乙酸铵，加入900mL水溶解，用乙酸调节溶液pH到4.0±0.1后加水至1000mL，混匀；B：甲醇。A：B=90：10

2. 实验结果

按照上述色谱条件（1.4）进行采集，L-色氨酸标准工作溶液和试样溶液色谱图如下：
L-色氨酸标准工作溶液（0.2μg/mL）