乳品（羊奶粉）中核苷酸的测定

摘要：本文建立了乳品（羊奶粉）中核苷酸的HPLC测定方法。参照国标GB 5413.40-2016中色谱条件并优化，采用色谱柱Shim-pack Scepter C18分析乳品（羊奶粉）中核苷酸，结果显示，五个目标物CMP、AMP、UMP、GMP、IMP峰型对称，与相邻杂质峰分离度大于1.5，满足日常检测需求。此方法可为乳品（羊奶粉）中核苷酸的检测提供参考。
关键词：乳品 羊奶粉 核苷酸 Shim-pack Scepter C18 HPLC
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-40DXR高效液相色谱仪；
色谱柱：Shim-pack Scepter C18（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-31020-06）；
纯水机： PR-FP-0120α-MT1（ + 60L 水箱 + 取水器）；
SHIMSEN Disc HPTFE 针式过滤器（ P/N： 380-00341）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 标准溶液配制

分别称取核苷酸标准品CMP、AMP、UMP、GMP和IMP适量，用超纯水溶解配制成CMP、AMP、UMP各100μg/mL，GMP、IMP各50μg/mL的混合标准溶液。

1.3 试样处理

称取混合均匀的固体试样5 g于100 mL锥形瓶中，加入20mL 50℃热水充分溶解试样，冷却至室温。用醋酸溶液调试样溶液pH4.1，移入50 mL容量瓶中，定容，滤纸过滤，所得滤液用0.45 μm微膜过滤备用。

1.4 分析条件

色谱柱：Shim-pack Scepter C18（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-31020-06）
柱温：30℃
流速：1.0 mL/min
进样量：10 µL
检测波长：PDA 254nm
流动相：A：称取1.360 g磷酸二氢钾，加0.4753 g四丁基硫酸氢铵，加1000 mL水溶解，用0.1mol/L磷酸氢二钾溶液调pH至3.2；B：甲醇。A：B=99：1

2. 实验结果

按照上述色谱条件（1.4）进行采集，混合标准溶液和试样溶液色谱图如下：
混合标准溶液：

试样溶液：

重现性
混合标准溶液重现性

试样溶液重现性

3. 结论

本文建立了乳品（羊奶粉）中核苷酸的HPLC测定方法。参照国标GB 5413.40-2016中色谱条件并优化，采用色谱柱Shim-pack Scepter C18分析乳品（羊奶粉）中核苷酸，结果显示，五个目标物CMP、AMP、UMP、GMP、IMP峰型对称，与相邻杂质峰分离度大于1.5，满足日常检测需求。此方法可为乳品（羊奶粉）中核苷酸的检测提供参考。