天麻特征图谱
2021年2月19日
摘要：本文建立了天麻特征图谱的HPLC方法。参照2020版《中国药典》天麻特征图谱色谱条件，采用色谱柱Shim-pack GISS C18（4.6×250 mm，5 μm）、SHIMSEN Ankylo C18（4.6×250 mm，5 μm）和Shim-pack VP-ODS（4.6×250 mm，5 μm），对对照药材参照物溶液、对照品参照物溶液和供试品溶液进行分析，结果显示规定的6个特征峰在供试品溶液中均有呈现，且与对照药材参照物溶液特征图谱中的6个特征峰相对应，其中峰1、峰2与天麻素对照品和对羟基苯甲醇对照品参照物保留时间相一致，且重现性良好。此方法可为天麻特征图谱分析提供参考。
关键词：天麻特征图谱 Shim-pack GISS C18 SHIMSEN Ankylo C18 Shim-pack VP-ODS HPLC
1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材
Shimadzu LC-20AD高效液相色谱仪；
色谱柱：Shim-pack GISS C18（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-30061-07；S/N：19I06474）
SHIMSEN Ankylo C18（5 μm，4.6×250 mm；P/N：380-01200-01；S/N：6AZ06022）
Shim-pack VP-ODS（5 μm，4.6×250 mm；P/N：228-34937-92；S/N：9082978）
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；
SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。
1.2 参照物溶液的制备
取天麻对照药材约0.5 g，置具塞锥形瓶中，加入50%甲醇25 mL，超声处理（功率500W，频率40 kHz）30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。另取天麻素对照品、对羟基苯甲醇对照品适量，精密称定，加乙腈-水（3：97）混合溶液制成每1 mL含天麻素50 μg、对羟基苯甲醇25 μg的混合溶液，作为对照品参照物溶液。
1.3 供试品溶液的制备
取本品粉末（过四号筛）约0.5 g，照对照药材参照物溶液制备方法同法制成供试品溶液。
1.4 分析条件及实验结果
1.4.1分析条件
色谱柱：Shim-pack GISS C18（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-30061-07；S/N：19I06474）
柱温：30℃
检测波长：220 nm
流速：0.8 mL/min
进样量：3 μL
流动相：A：乙腈；B：0.1%磷酸水
梯度程序如下：
实验结果
按照上述色谱条件（1.4.1）进行采集，对照品参照物溶液、对照药材参照物溶液和供试品溶液色谱图如下：
对照品参照物溶液：
对照药材参照物溶液：
供试品溶液：
重现性
对照品参照物溶液重现性
供试品溶液重现性
对照药材参照物溶液重现性
1.4.2分析条件
色谱柱：SHIMSEN Ankylo C18（5 μm，4.6×250 mm；P/N：380-01200-01；S/N：6AZ06022）
柱温：30℃
检测波长：220 nm
流速：0.8 mL/min
进样量：3 μL
流动相：A：乙腈；B：0.1%磷酸水
梯度程序如下：
实验结果
按照上述色谱条件（1.4.2）进行采集，对照品参照物溶液、对照药材参照物溶液和供试品溶液色谱图如下：
对照品参照物溶液：
对照药材参照物溶液：
供试品溶液：
重现性
对照品参照物溶液重现性
供试品溶液重现性
对照药材参照物溶液重现性
1.4.3分析条件
色谱柱：Shim-pack VP-ODS（5 μm，4.6×250 mm；P/N：228-34937-92；S/N：9082978）
柱温：30℃
检测波长：220 nm
流速：0.8 mL/min
进样量：3 μL
流动相：A：乙腈；B：0.1%磷酸水
梯度程序如下：
实验结果
按照上述色谱条件（1.4.3）进行采集，对照品参照物溶液、对照药材参照物溶液和供试品溶液色谱图如下：
对照品参照物溶液：
对照药材参照物溶液：
供试品溶液：
重现性
对照品参照物溶液重现性
供试品溶液重现性
对照药材参照物溶液重现性
2. 结论
综上，本文建立了天麻特征图谱的HPLC方法。参照2020版《中国药典》天麻特征图谱色谱条件，采用色谱柱Shim-pack GISS C18（4.6×250 mm，5 μm）、SHIMSEN Ankylo C18（4.6×250 mm，5 μm）和Shim-pack VP-ODS（4.6×250 mm，5 μm），对对照药材参照物溶液、对照品参照物溶液和供试品溶液进行分析，结果显示规定的6个特征峰在供试品溶液中均有呈现，且与对照药材参照物溶液特征图谱中的6个特征峰相对应，其中峰1、峰2与天麻素对照品和对羟基苯甲醇对照品参照物保留时间相一致，且重现性良好。此方法可为天麻特征图谱分析提供参考。