陈皮中呕吐毒素的测定

摘要：本应用建立了陈皮中呕吐毒素的测定方法。按照2020年版《中国药典》四部中2351真菌毒素测定法中呕吐毒素测定法（第一法），采用岛津SHIMSEN呕吐毒素免疫亲和柱产品对样品进行净化，Shim-pack GIST C18色谱柱进行分离，分析陈皮中的呕吐毒素，回收率高，重复性好，满足《中国药典》要求，此方法可为陈皮中呕吐毒素的测定提供参考。

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

仪器配置:岛津高效液相色谱仪 LC-20AT；
色谱柱：Shim-pack GIST C18 (250mm×4.6mm，5μm ；P/N：227-30017-08)
免疫亲和柱：SHIMSEN 呕吐毒素免疫亲和柱，3mL（P/N：380-00912）
标准品：SHIMSEN 呕吐毒素溶液（P/N：380-03391）
SHIMSEN Arc Disc HPTFE 针式过滤器（P/N：380-00341-05）
LC/MS 认证样品瓶 LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 对照品溶液制备

精密量取呕吐毒素对照品溶液（100μg/mL）（SHIMSEN呕吐毒素溶液，货号:380-03391）1.0mL，置20mL量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，即得5μg/ml的溶液，作为贮备溶液，精密量取贮备溶液2.0mL，置25mL量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，即得0.4μg/ml的工作溶液。

1.3 分析条件

色谱柱：Shim-pack GIST C18（250mm×4.6mm，5μm；P/N:227-30017-08）；
流速：1.0mL/min；
进样量：5μL-25μL
柱温：30°C；
流动相：甲醇-水=20:80
检测器及波长：紫外检测器：220nm

1.4 样品前处理

1.4.1 样品提取

称取20g陈皮样品粉末（过二号筛）精密称定，置均质瓶中，加入聚乙二醇（相对分子质量8000）5g，精密加入水100mL，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000r/min），离心5分钟（离心速度4000r/min），滤过，精密量取续滤液5mL，待净化。

1.4.2 样品净化

SHIMSEN 呕吐毒素免疫亲和柱，3mL
精密量取上述上清液5mL，通过免疫亲和柱（SHIMSEN 呕吐毒素免疫亲和柱，货号:380-00912），流速每分钟3mL，用水10mL洗脱，弃去洗脱液，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用1mL甲醇洗脱，收集洗脱液，置2mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液供HPLC分析。流程图见下图1。

2. 结果及讨论

2.1 色谱图

2.2 线性范围

分别吸取对照品工作液，5μL、1μL、15μL、20μL、25μL，注入液相色谱仪，按1.2中的分析条件进行测定，外标法定量。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，如下图所示。

2.3 陈皮中呕吐毒素的检测添加回收结果

将陈皮样品进行500μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，具体结果如下:

3. 结论

本应用建立了陈皮中呕吐毒素的测定方法。按照2020年版《中国药典》四部中2351真菌毒素测定法中呕吐毒素测定法（第一法），采用岛津SHIMSEN呕吐毒素免疫亲和柱产品对样品进行净化， Shim-pack GIST C18色谱柱进行分离，分析陈皮中的呕吐毒素，回收率高，重复性好，满足《中国药典》要求，此方法可为陈皮中呕吐毒素的测定提供参考。