牛胆粉中胆酸类含量测定

摘要：本文建立了牛胆粉中胆酸类含量测定的HPLC方法。参照《人工牛黄》公示稿中牛胆粉质量标准，采用色谱柱ShimNex UP C18分析，系统适用性溶液中，4种胆酸峰形良好，牛磺胆酸与牛磺猪去氧胆酸的分离度大于2.0，鹅去氧胆酸与去氧胆酸的分离度大于1.5，且牛磺胆酸峰的理论塔板数远高于10000；对照品溶液中，牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨去氧胆酸、胆酸等5种胆酸峰形良好，且可完全分离，满足《人工牛黄》公示稿中牛胆粉质量标准要求。此方法可为牛胆粉中胆酸类含 量测定提供参考。
关键词：人工牛黄 牛胆粉 胆酸类 ShimNex UP C18 HPLC
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

ShimadzuLC-40D XR 高效液相色谱仪；
色谱柱：ShimNex UP C18(5μm，4.6×250 mm；P/N：380-01231-49)；
纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱 + 取水器）；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC-MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 系统适用性溶液的制备

各取牛磺胆酸对照品、牛磺猪去氧胆酸对照品、鹅去氧胆酸对照品及去氧胆酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL各含0.2 mg的溶液，作为系统适用性溶液。

1.3 对照品溶液的制备

取牛磺胆酸对照品、牛磺去氧胆酸对照品、甘氨胆酸对照品、甘氨去氧胆酸对照品、胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含牛磺胆酸0.4mg、牛磺去氧胆酸0.2mg、甘氨胆酸0.4mg、甘氨去 氧胆酸0.2mg、胆酸0.1mg的溶液，即得。

1.4 分析条件

色谱柱：ShimNex UP C18(5μm，4.6×250 mm；P/N：380-01231-49)
柱温：30℃
检测器：蒸发光散射检测器ELSD-III；Gain：5；漂移管温度50℃
流速：1.0 mL/min
进样量：5 µL
流动相：A：0.2%三氟乙酸水；B：乙腈
梯度条件：

2. 实验结果

按照上述色谱条件（1.4）进行采集，系统适用性溶液和对照品溶液色谱图如下：
系统适用性溶液

对照品溶液

重现性
系统适用性溶液重现性

3. 结论

本文建立了牛胆粉中胆酸类含量测定的HPLC方法。参照《人工牛黄》公示稿中牛胆粉质量标准，采用色谱柱ShimNex UP C18分析，系统适用性溶液中，4种胆酸峰形良好，牛磺胆酸与牛磺猪去氧胆酸的分离度大于2.0，鹅去氧胆酸与去氧胆酸的分离度大于1.5，且牛磺胆酸峰的理论塔板数远高于10000；对照品溶液中，牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨去氧胆酸、胆酸等5种胆酸峰形良好，且可完全分离，满足《人工牛黄》公示稿中牛胆粉质量标准要求。此方法可为牛胆粉中胆酸类含量测定提供参考。