猪肉中4种喹诺酮类药物残留量的测定

摘要：本研究建立了猪肉中4种沙星的测定方法。参照农业部1025号公告-14-2008前处理方法，采用岛津的SHIMSEN Styra C18-U产品对猪肉样品进行净化，Shim-pack Scepter C18色谱柱进行分离，岛津LC-20AD检测分析。对空白样品加标后（添加浓度：恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星为20μg/kg，达氟沙星为4μg/kg），按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示，加标回收率为77.37-86.30%，RSD为1.95-3.70%，回收率高，重现性好。该方法为猪肉中4种沙星的测定提供参考。
关键词：SHIMSEN Styra C18-U 猪肉 喹诺酮 HPLC
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-20AD超高效液相色谱仪；
色谱柱：Shim-pack Scepter C18（5μm，4.6×250 mm；P/N：227-31020-06）；
纯水机： PR-FP-0120α-MT1（ + 60L 水箱 + 取水器）；
固相萃取小柱：SHIMSEN Styra C18-U（100mg/1mL；P/N：380-00876-10）；
SHIMSEN Disc HPTFE 针式过滤器（ P/N： 380-00341）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 分析条件

色谱柱：Shim-pack Scepter C18（5μm，4.6×250 mm；P/N：227-31020-06）
流速：1.0mL/min
进样量：20μL
柱温：25℃
荧光检测器：激发波长：280nm；发射波长：450nm
流动相：A：磷酸/三乙胺溶液（取85%磷酸3.4 mL，加水稀释至1000mL，三乙胺调pH至2.47）；B：乙腈； A：B=82：18

1.3 样品前处理

1.3.1 样品提取

取试料2g于50 mL离心管中，加10mL磷酸盐提取液（称取磷酸二氢钾6.8g，加水溶解并稀释至500 mL，用0.5 M氢氧化钠溶液调pH至6.98），摇匀，超声10min，于10000 r/min离心3min，取出上清液，向残渣中继续加10mL磷酸盐提取液，按照上述操作重复提取1次，合并2次上清液，用磷酸盐提取液定容至20mL，精密量取5mL，待净化。

1.3.2 样品净化

SHIMSEN Styra C18-U 100mg/1mL
2mL甲醇、1mL水、2mL上述磷酸盐提取液活化，弃去流出液；待净化液上样，弃去流出液；1mL水清洗，弃去流出液，抽干小柱；2mL洗脱液*洗脱，收集流出液，抽干小柱，用洗脱液定容至2mL，涡旋混匀，过0.22μmHPTFE滤膜，供HPLC分析。
洗脱液*：乙腈：磷酸/三乙胺溶液0.05M（取85%的磷酸3.4mL，加水稀释至1000mL，用三乙胺调pH至2.47）=30:70

2. 实验结果

2.1 色谱图

2.2 猪肉中4种喹诺酮类药物残留量的HPLC检测添加回收结果

将猪肉空白样品进行加标后（添加浓度：恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星为20μg/kg，达氟沙星为4 μg/kg），按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，具体结果如下：加标回收率为77.37-86.30%，RSD为1.95-3.70%，回收率高，重现性好。

3. 结论

本研究建立了猪肉中4种沙星的测定方法。参照农业部1025号公告-14-2008前处理方法，采用岛津的SHIMSEN Styra C18-U产品对猪肉样品进行净化，Shim-pack Scepter C18色谱柱进行分离，岛津LC-20AD检测分析。对空白样品加标后（添加浓度：恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星为20μg/kg，达氟沙星为4μg/kg），按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示，加标回收率为77.37-86.30%，RSD为1.95-3.70%，回收率高，重现性好。该方法为猪肉中恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星和达氟沙星的测定提供参考。