两性霉素B

摘要：本文建立了两性霉素B的HPLC测定方法。结果表明，采用色谱柱Shim-Pack GIST C18 (4.6×250 mm，5 μm )分析，其中主成分峰高的信噪比大于10，杂质C峰与杂质B峰之间的分离度均满足《中国药典》要求。此方法可为两性霉素B的检测提供参考。
关键词：两性霉素B Shim-Pack GIST C18 HPLC
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-20AD高效液相色谱仪；
色谱柱：Shim-Pack GIST C18 (4.6×250 mm，5 μm；P/N：227-30017-08)；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 分析条件

色谱柱：Shim-Pack GIST C18 (4.6×250 mm，5 μm )
流动相A：乙腈:磷酸溶液（pH=1.00±0.05）（300:700）
流动相B：乙腈:磷酸溶液（pH=1.00±0.05）（500:500）
柱温：40℃
检测波长：303nm,383nm
流速：0.5mL/min
进样量：100 μL
梯度程序如下：

1.3 对照品溶液的制备

取两性霉素B 8.0mg精密称定，置10mL棕色容量瓶中，加二甲基甲酰胺溶解并稀释制成0.8mg/mL溶液，摇匀；过滤并精密量取滤液0.01mL，置10mL容量瓶中，用稀释剂[二甲基甲酰胺：水（1：1）]定量稀释制成0.8μg/mL溶液。

1.4 供试品溶液的制备

取本品2片（5 mg/片）精密称定，研细，取0.89866g细粉精密称定，置10mL容量瓶中，加二甲基甲酰胺溶解并稀释制成0.8mg/mL溶液，摇匀；过滤并精密量取滤液1mL，置10mL容量瓶中，用稀释剂[二甲基甲酰胺：水（1：1）]定量稀释制成80μg/mL溶液。

1.5 系统适应性溶液

取本品8.0mg精密称定，置50mL棕色容量瓶中，加5mL二甲基甲酰胺使溶解，用甲醇稀释至刻度，加0.1mL盐酸，摇匀，放置1h后，精密量取5mL，置10mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。

1.6 灵敏度溶液的制备

精密量取1mL对照溶液，置10mL棕色容量瓶中，用稀释剂[二甲基甲酰胺：水（1：1）]定量稀释制成0.08μg/mL溶液。

2. 结果及讨论

2.1 色谱图

按照上述色谱条件（1.2）进行采集，对照品溶液色谱图和样品色谱图如下：
有关物质：

供试品溶液：

2.2 精密度实验

将对照品及供试品连续进样3针。按上述实验条件（1.2）进行采集。其结果如下所示。

3. 结论

本文参考《中国药典》中色谱条件，并对其条件进行优化，最终建立了两性霉素B的HPLC测定方法。结果表明，采用色谱柱Shim-Pack GIST C18 (4.6×250 mm，5 μm )分析，其中主成分峰高的信噪比大于10，杂质C峰与杂质B峰之间的分离度均满足《中国药典》要求。此方法可为两性霉素B的检测提供参考。