盐酸四环素有关物质分析

摘要：本文建立了盐酸四环素有关物质试验的HPLC测定方法。参照《欧洲药典》讨论稿中色谱条件，采用色谱柱Inertsil C8（4.6×150mm，5μm），对盐酸四环素对照品溶液、盐酸四环素供试品溶液进行分析。各个杂质峰形对称，且杂质A和杂质G的分离度大于1.5，四环素和杂质B大于2.0，杂质D和杂质C大于2.0，满足《欧洲药典》讨论稿要求。此方法可为盐酸四环素有关物质试验提供参考。
关键词：盐酸四环素 有关物质 Inertsil C8 HPLC
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-20AD高效液相色谱仪；
Inertsil C8（4.6×150 mm，5 μm；P/N：5020-01224；S/N：19E0019051）；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 溶液的制备

1.2.1 对照品溶液的制备

称取20.0 mg盐酸四环素标准品，用1 g/L的盐酸溶液定容至25 mL，即为对照溶液a；称取10.0 mg脱水差分四环素（杂质D），10.0 mg脱水四环素（杂质C），用1 g/L的盐酸溶液定容至100 mL，即为对照溶液c；称取20.0 mg盐酸四环素，加1.0 mL对照溶液c，用1 g/L的盐酸溶液定容至25 mL，即为对照溶液f。

1.2.2 供试品溶液的制备

称取20.0 mg盐酸四环素样品，用1 g/L的盐酸溶液定容至25 mL，摇匀后，用0.22 µm微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液，备用。

1.3 分析条件

色谱柱：Inertsil C8 (4.6×150 mm, 5μm; P/N: 5020-01224; S/N: 19E0019051）
柱温： 50℃
检测波长：254 nm
流速：1.3 mL/min
进样量：10μL
流动相：A：四氢呋喃：甲醇：乙腈=5:15:80
             B：0.05%三氟乙酸
梯度洗脱程序如下

2. 结果及讨论

按照上述色谱条件（1.3）进行采集，色谱图如下：
对照溶液：

重现性：

供试品溶液:

重现性：

3. 结论

本文建立了盐酸四环素有关物质系统适用性试验的HPLC测定方法。参照《欧洲药典》讨论稿中色谱分析条件，采用色谱柱Inertsil C8 (4.6×150 mm, 5μm），对盐酸四环素对照溶液、盐酸四环素供试品溶液进行分析，各个杂质峰形对称，系统适用性对照品溶液峰形与标准图谱一致，且杂质A和杂质G的分离度≥1.5；四环素和杂质B的分离度≥2.0；杂质D和杂质C的分离度≥2.0，满足《欧洲药典》讨论稿需求。此方法可为盐酸四环素有关物质分析提供参考。