大黄中蒽醌含量测定

摘要：本文建立了大黄中总蒽醌、游离蒽醌的含量测定的HPLC方法。参照《中国药典》大黄中总蒽醌、游离蒽醌项下的色谱条件，采用色谱柱Shim-pack GIS C18（4.6×250mm，3μm），对总蒽醌、游离蒽醌对照品、大黄供试品进行分析，结果显示各成分的峰形对称，且与相邻杂质的分离度远大于1.5，满足《中国药典》要求。此方法可为大黄中总蒽醌、游离蒽醌的含量测定提供参考。
关键词：大黄 总蒽醌 游离蒽醌 Shim-pack GIS C18 HPLC
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-20AD高效液相色谱仪；
Shim-pack GIS C18（3μm，4.6×250 mm；P/N：227-30096-32；S/N：18C02352）；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 溶液的制备

1.2.1 对照品溶液的制备

总蒽醌：精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成1mL含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各80μg，大黄素甲醚40μg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2mL，混匀，即得（每1mL中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16μg，含大黄素甲醚8μg）。
游离蒽醌：取总蒽醌项下的对照品溶液，即可。

1.2.2 供试品溶液的制备

总蒽醌：取本品粉末（过四号筛）约0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5mL，置烧瓶中，挥去溶剂，加8%盐酸溶液10mL，超声处理2分钟，再加三氯甲烷10mL，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10mL，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
游离蒽醌：取本品粉末（过四号筛）约0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取得滤液，即得。

1.3 分析条件

Shim-pack GIS C18 (3μm，4.6×250 mm，P/N: 227-30096-32，S/N：18C02352 )
柱温： 40℃
检测波长：254 nm
流速：0.8 mL/min
进样量：20μL
流动相：流动相：0.1%磷酸溶液: 甲醇 = 15：85

2. 结果及讨论

按照上述色谱条件（1.3）进行采集，色谱图如下：
对照品溶液：

重现性：

总蒽醌供试品溶液:

重现性：

游离蒽醌供试品溶液：

重现性：

3. 结论

本文建立了大黄中总蒽醌、游离蒽醌的含量测定的HPLC方法。参照《中国药典》大黄中总蒽醌、游离蒽醌项下的色谱条件，采用色谱柱Shim-pack GIS C18（4.6×250mm，3μm），对总蒽醌、游离蒽醌对照品、大黄供试品进行分析，结果显示各成分的峰形对称，且与相邻杂质的分离度远大于1.5，满足《中国药典》要求。此方法可为大黄中总蒽醌、游离蒽醌的含量测定提供参考。