薏苡仁中黄曲霉毒素的测定

摘要：本应用建立了薏苡仁中黄曲霉毒素的测定方法。按照2020年版《中国药典》四部中2351真菌毒素 测定法中黄曲霉毒素测定法(第一法)，采用岛津SHIMSEN黄曲霉毒素免疫亲和柱产品对薏苡仁样品提取液进行净化，Shim-pack GIST C18色谱柱进行分离，分析薏苡仁中的黄曲霉毒素，回收率高，重复性好，满足《中国药典》要求，此方法可为薏苡仁中黄曲霉毒素的测定提供参考。

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

仪器配置:岛津高效液相色谱仪 LC-20AD；
色谱柱：Shim-pack GIST C18 (250mm×4.6mm，5μm ；P/N：227-30017-08)
免疫亲和柱:SHIMSEN 黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，1mL (P/N：380-00909)
标准品:SHIMSEN 黄曲霉毒素混标溶液 (P/N：380-03396)
SHIMSEN Arc Disc HPTFE 针式过滤器(P/N：380-00341-05)
LC/MS 认证样品瓶 LabTotal Vial(P/N：227-34001-01)

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 混合对照品溶液制备

精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标识浓度分别为 10μg/mL、3μg/mL、10μg/mL、3μg/mL)(SHIMSEN黄曲霉毒素混标溶液，货号：380-03396））1.0mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为贮备溶液(1)，精密量取贮溶液(1)0.5mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为贮备溶液(2)，精密量取贮备溶液(2)1.0mL，置25mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为工作溶液。

1.3 分析条件

色谱柱：Shim-pack GIST C18（250mm×4.6mm，5μm；P/N:227-30017-08）；
流速：0.8mL/min；衍生化泵流速：0.3mL/min
进样量：5μL-25μL
柱温：30°C；衍生化温度70°C
流动相：甲醇-乙腈-水（40:18:42）
衍生溶液：0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100mL使溶解，用水稀释至1000mL制成)
检测器：荧光检测器；激发波长360nm，发射波长450nm

1.4 样品前处理

1.4.1 样品提取

称取15g 薏苡仁样品粉末(过二号筛)精密称定，置均质瓶中，加入氯化钠3g，精密加入70%甲醇 溶液75mL，高速搅拌2分钟(搅拌速度大于11000r/min)，离心5分钟(离心速度4000r/min)， 精密量取上清液15mL，置于50mL 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，离心10分钟(离心速度4000r/min)，精密量取上清液20mL待净化。至刻度，作为贮备溶液(2)，精密量取贮备溶液(2)1.0mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为工作溶液。

1.4.2 样品净化

SHIMSEN 黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，1mL
精密量取上述上清液20mL，通过免疫亲和柱（SHIMSEN 黄曲霉毒素免疫亲和柱，货号:380-00910），流速每分钟3mL，用水20mL洗脱，弃去洗脱液，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用1.8mL甲醇洗脱，收集洗脱液，置2mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液供HPLC分析。流程图见下图1。

2. 结果及讨论

2.1 色谱图

2.2 线性范围

分别吸取对照品混合工作液5μL、1μL、15μL、20μL、25μL，注入液相色谱仪，按1.2中的分析条件进行测定，外标法定量。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，如下图所示。

2.3 薏苡仁中黄曲霉毒素的检测添加回收结果

将薏苡仁样品进行加标(添加浓度分别为：黄曲霉毒素B1和G1为1ng/g;黄曲霉毒素B2和G2为0.3ng/g)，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，具体结果如下:

3. 结论

本应用建立了薏苡仁中黄曲霉毒素的测定方法。按照2020年版《中国药典》四部中2351真菌毒素测定法中黄曲霉毒素测定法（第一法），采用岛津SHIMSEN黄曲霉毒素免疫亲和柱产品对薏苡仁样品提取液进行净化，Shim-pack GIST C18色谱柱进行分离，分析薏苡仁中的黄曲霉毒素，回收率高，重复性好，满足《中国药典》要求，此方法可为薏苡仁中黄曲霉毒素的测定提供参考。