食品中维生素B12的测定（第二法）

摘要：本文建立了食品中维生素B12的LC-MS/MS测定方法。参照国标GB 5009.285-2022中第二法色谱条件并进行优化，采用色谱柱Shim-pack Scepter C18-120和Shim-pack GIST C18-AQ分析维生素B12，结果显示，维生素B12峰形对称，满足日常检测要求。此方法可为食品中维生素B12的检测提供参考。
关键词：食品 维生素B12 Shim-pack Scepter C18-120 Shim-pack GIST C18-AQ LC-MS/MS
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-30AD与LCMS-8050联用系统；
色谱柱：Shim-pack Scepter C18-120（1.9 μm，2.1×100 mm；P/N：227-31012-05）；
色谱柱：Shim-pack GIST C18-AQ（1.9 μm，2.1×100 mm；P/N：227-30807-02）；
纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱 + 取水器）；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC-MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 维生素B12标准工作溶液的制备

准确量取维生素B12标准品母液适量，加水配制成每1 mL含100 ng的溶液，作为高浓度标准工作溶液；将上述高浓度标准工作溶液用水稀释成每1 mL含2 ng的溶液作为低浓度标准工作溶液，备用。

1.3 分析条件

UHPLC条件
柱温：40℃
流速：0.3 mL/min （色谱柱出口连接3通，废液与检测器流路的分流比大约1：1）
进样量：10 µL
流动相： A：2.5 mM乙酸铵水溶液 B：90%乙腈水

质谱条件
离子化模式：ESI，正离子扫描
碰撞气：氩气
雾化气：氮气 3 L/min
接口温度：300℃
加热模块温度：400 ℃
扫描模式：多反应监测(MRM)
加热气：干燥空气 10 L/min
干燥气：氮气 10 L/min
DL温度：250 ℃

各化合物MRM参数见下表：

2. 实验结果

按照上述色谱条件（1.3）进行采集，标准工作溶液MRM色谱图如下：

2.1 色谱柱：Shim-pack GIST C18-AQ（1.9 μm，2.1×100 mm；P/N：227-30807-02）

标准工作溶液（100 ng/mL）

标准工作溶液（2 ng/mL）

重现性

标准工作溶液（2 ng/mL）重现性

2.2 色谱柱：Shim-pack Scepter C18-120（1.9 μm，2.1×100 mm；P/N：227-31012-05）

标准工作溶液（100 ng/mL）

标准工作溶液（2 ng/mL）

重现性

标准工作溶液（2 ng/mL）重现性

3. 结论

本文建立了食品中维生素B12的LC-MS/MS测定方法。参照国标GB 5009.285-2022中第二法色谱条件并进行优化，采用色谱柱Shim-pack Scepter C18-120和Shim-pack GIST C18-AQ分析维生素B12，结果显示，维生素B12峰形对称，满足日常检测要求。此方法可为食品中维生素B12的检测提供参考。