婴儿配方奶粉中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的测定

摘要：本研究建立了婴儿配方奶粉中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的测定方法。参照GB 5009.284-2021前处理方法，采用岛津的SHIMSEN Styra HLB产品对婴儿配方奶粉样品进行净化，Shim-pack Scepter HD-C18色谱柱进行分离，岛津串联质谱LCMS-8050检测分析。对空白样品加标后（添加浓度：50μg/kg），按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示，加标回收率为102.37%-108.47%，RSD为2.70%-3.75%，回收率高，重现性好。该方法婴儿配方奶粉等食品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的测定提供参考。
关键词：SHIMSEN Styra HLB 婴儿配方奶粉 香兰素 LCMSMS

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-30A与LCMS-8050联用系统；
色谱柱：Shim-pack Scepter HD-C18（1.9 μm，2.1×100 mm；P/N：227-31026-05）；
纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱+取水器）；
固相萃取小柱：SHIMSEN Styra HLB（200mg/6mL；P/N：380-00855-10）；
SHIMSEN DiscHydrophilic PTFE（IC）针式过滤器（P/N：380-06120-01）；
LC/MS 认证样品瓶 LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 分析条件

UHPLC条件
色谱柱：Shim-pack ScepterHD-C18（1.9 μm，2.1×100 mm；P/N：227-31026-05）
流速：0.3 mL/min
进样量：5 μL
柱温：30 ℃
流动相：A：0.5%甲酸水；B：乙腈
梯度洗脱程序如下：

质谱条件
离子化模式：ESI，正离子扫描
碰撞气：氩气
雾化气：氮气 3 L/min
接口温度：300℃
加热模块温度：400 ℃
扫描模式：多反应监测(MRM)
加热气：干燥空气 10 L/min
干燥气：氮气 10 L/min
DL温度：250 ℃

各化合物MRM参数见下表：

1.3 样品前处理

1.3.1 样品提取

取试料1g于50 mL离心管中，加40μL内标溶液（2.5ppm），加入10mL水和480μL盐酸溶液（1 mol/L），涡旋振荡1min，加入乙腈20 mL，手动振荡30s，超声提取30min，加入5g氯化钠，手动振荡30s，于8000 r/min离心5 min，取出上清液，40℃下减压浓缩至1mL左右，加水10mL，混匀，待净化。样品提取流程图见下图1。

1.3.2 样品净化

SHIMSEN Styra HLB 200mg/6mL
5mL甲醇、5mL水活化，弃去流出液；待净化液上样，弃去流出液；5mL水清洗，弃去流出液，减压抽干小柱5min；10mL80%甲醇水洗脱，收集流出液；50℃下减压浓缩至900μL左右，加甲醇定容至1mL，涡旋混匀，过0.22μm滤膜，供LC-MS/MS分析。净化流程图见图2。

2. 实验结果

2.1 混合标准品溶液的MRM色谱图

2.2 婴儿配方奶粉中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的LC-MS/MS检测添加回收结果

将婴儿配方奶粉空白样品进行50.0μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，具体结果如下：50.0μg/kg加标浓度的加标回收率为102.37%-108.47%，RSD为2.70%-3.75%。

3. 结论

本研究建立了婴儿配方奶粉中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的测定方法。参照GB 5009.284-2021前处理方法，采用岛津的SHIMSEN StyraHLB产品对婴儿配方奶粉样品进行净化，Shim-pack ScepterHD-C18色谱柱进行分离，岛津串联质谱LCMS-8050检测分析。对空白样品加标后（添加浓度：50μg/kg），按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示，加标回收率为102.37%-108.47%，RSD为2.70%-3.75%，回收率高，重现性好。该方法婴儿配方奶粉等食品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的测定提供参考。