酒石酸泰乐菌素中组胺的测定

摘要：本文建立了酒石酸泰乐菌素中组胺LC-MS/MS测定方法。采用岛津Shim-pack Velox HILIC色谱柱进行分离，岛津串联质谱LCMS-8050检测。对空白样品进行0.1 mg/kg 和1.0 mg/kg浓度加标，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示： 0.1 mg/kg加标浓度的加标回收率为90.75%，RSD为3.07%；1.0 mg/kg加标浓度的加标回收率为91.23%，RSD为3.86%，回收率高，重现性好。该方法适用于酒石酸泰乐菌素中组胺测定。
关键词：酒石酸泰乐菌素 组胺 LC-MS/MS
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

仪器配置：Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统；
色谱柱：Shim-pack Velox HILIC（2.1×50mm，2.7μm；P/N：227-32025-02；S/N：180628P)
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 分析条件

UHPLC 条件
色谱柱：Shim-pack Velox HILIC（2.1×50mm，2.7μm；P/N：227-32025-02；S/N：180628P)
流速：0.5 mL/min
进样量：2 µL
柱温：40℃
流动相： A：100 Mm乙酸铵溶液 B：乙腈
梯度洗脱程序如下：

质谱条件
离子化模式：ESI，正离子扫描
碰撞气：氩气
雾化气：氮气 3 L/min
接口温度：300℃
加热模块温度：400 ℃
扫描模式：多反应监测(MRM)
加热气：氮气 10 L/min
干燥气：氮气 10 L/min
DL温度：250 ℃

组胺MRM参数见下表

*定量离子对

1.3 标曲工作溶液的制备

精密称取组胺适量，加水溶解并稀释至浓度为2 ppm的母液。取母液适量，用80%乙腈水逐级稀释至200 ng/mL、100 ng/mL、50 ng/mL、20 ng/mL、10 ng/mL、5 ng/mL、2 ng/mL、1 ng/mL，作为标准曲线工作溶液。

1.4 供试品溶液制备

精密称取酒石酸泰乐菌素1.0 g，加水10 mL，涡旋混匀，超声10 min，8000 r/min离心2 min，精密量取上清液200 μL，加800 μL 乙腈，涡旋混匀，过0.22 μm有机滤膜，备用。

2. 结果及讨论
2.1 标准品的MRM色谱图

组胺标准品溶液MRM色谱图（2 ng/mL）

2.2 线性范围和检测限

取80%乙腈水溶液配制组胺工作液，得到1、2、5、10、20、50、100、200 ng/mL不同浓度的标准品，按2.3中的分析条件进行测定，外标法定量。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校准曲线，线性良好，线性方程、线性范围、相关系数及检出限、定量限结果见下表。

2.3 精密度实验

对2.0 ng/mL浓度的组胺标准溶液连续5次进样，考察仪器的重复性，保留时间和峰面积的重复性RSD分别为0.10%和3.68%，仪器重复性良好。
 

2.4 方法准确度实验

将酒石酸泰乐菌素空白样品进行1.0 mg/kg 和0.1 mg/kg浓度加标，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，具体结果如下：1.0 mg/kg加标浓度的加标回收率为91.23%，RSD为3.86%；0.1 mg/kg加标浓度的加标回收率为90.75%，RSD为3.07%。

3. 结论

本文建立了酒石酸泰乐菌素中组胺LC-MS/MS测定方法。采用岛津Shim-pack Velox HILIC色谱柱进行分离，岛津串联质谱LCMS-8050检测。对空白样品进行0.1 mg/kg 和1.0 mg/kg浓度加标，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示： 0.1 mg/kg加标浓度的加标回收率为90.75%，RSD为3.07%；1.0 mg/kg加标浓度的加标回收率为91.23%，RSD为3.86%，回收率高，重现性好。该方法适用于酒石酸泰乐菌素中组胺测定。