猪肉中五氯酚的测定
2020年6月30日
摘要：参考国标GB 23200.92-2016，建立了猪肉中五氯酚残留量的测定方法。采用岛津的WondaSep MAX固相萃取小柱对猪肉样品进行净化，Shim-pack XR-ODSⅢ色谱柱进行分离，串联质谱检测分析。对空白样品1.0 μg/kg和4.0 μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行5份样品考察回收率和RSD，结果显示，1.0 μg/kg加标浓度的加标回收率为77.38%-88.61%，RSD为5.52%；4.0 μg/kg加标浓度的加标回收率为91.35%-96.40%，RSD为2.54%，回收率高，重现性好。该方法适用于猪肉中五氯酚残留量的测定。
关键词：五氯酚 猪肉 WondaSep MAX LC-MSMS
1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材
仪器配置：Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统；
色谱柱：Shim-pack XR-ODSⅢ，2.0 mm×75 mm L，1.6 μm (P/N：228-59922-92);
固相萃取小柱：WondaSep MAX 60 mg/3Ml（P/N：5010-81941）；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；
SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。
1.2 分析条件
UHPLC 条件
色谱柱：Shim-pack XR-ODS Ⅲ，2.0 mm×75 mm L，1.6 μm (P/N：228-59922-92)
流 速：0.3 mL/min
进样量：10 μL
柱 温：40 ℃
流动相： A：0.1%甲酸水+2 mM 甲酸铵水溶液 B：甲醇
梯度洗脱程序如下：
质谱条件
离子化模式：ESI，负离子扫描
碰撞气：氩气
雾化气：氮气 3 L/min
接口温度： 300℃
加热模块温度：400 ℃
扫描模式：多反应监测(MRM)
加热气：氮气 10 L/min
干燥气：氮气 10 L/min
DL温度：250 ℃
五氯酚MRM参数见下表
1.3 样品前处理
1.3.1样品提取
取2.0 g均质猪肉，加入6 mL 5%三乙胺的乙腈-水溶液（乙腈：水=7：3），振摇1 min，超声5 min，8000 r/min 离心5 min，收集上清液；残渣用6 mL 5%三乙胺的乙腈-水溶液（乙腈：水=7：3）按上述步骤再次提取，合并上清，混匀，待净化。流程图见下图1。
1.3.2 样品净化
WondaSep MAX 60 mg/3 mL
5 mL甲醇、5 mL水活化；待净化液上样，弃去流出液；5 mL 5%氨水溶液、5 mL甲醇、5 mL 2%甲酸的甲醇-水溶液（2%甲酸甲醇：水=1：1）淋洗，弃去流出液，真空泵抽干小柱5 min；4 mL 4%甲酸甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，用4%甲酸甲醇定容至4 mL，混匀，用0.22 μm有机滤膜过滤，供测定。流程图见下图2。
1.4 标准曲线的绘制
取空白样品，按上述1.3.1和1.3.2处理，使用空白基质配制浓度分别为0.5 μg/L、1 μg/L、2 μg/L、5 μg/L、10 μg/L的标准样品。
2. 结果及讨论
2.1 标准品的MRM色谱图
2.2 线性范围
取空白溶液配制混合工作液，得到0.5 μg/L、1 μg/L、2 μg/L、5 μg/L、10 μg/L不同浓度的样品，按1.2中的分析条件进行测定，外标法定量。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，如图3所示。线性方程、相关系数、线性范围见表1。
2.3 猪肉中五氯酚的LC-MS/MS检测添加回收结果
将猪肉空白样品进行1.0 μg/kg和4.0 μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行5份样品考察回收率和RSD，具体结果如下：1.0 μg/kg加标浓度的加标回收率为77.38%-88.61%，RSD为5.52%；4.0 μg/kg加标浓度的加标回收率为91.35%-96.40%，RSD为2.54%。
3. 结论
综上，本方案采用岛津的WondaSep MAX固相萃取小柱对鸡肉样品进行净化，Shim-pack XR-ODSⅢ色谱柱进行分离，采用岛津串联质谱LCMS-8050检测分析，建立了猪肉样品中五氯酚的检测方法，该方法回收率高、重现性好，适用于猪肉样品中五氯酚的测定。