草鱼中四环素类药物残留量的测定

2021年11月03日

摘要:四环素类药物属广谱抗生素,具有良好的杀菌和抗菌作用,水产养殖中常用于防治水生动物的细菌性疾病,但这些药物会在水生动物体内残留,从而对人类的健康产生有害影响。本研究采用岛津InertSep HLB产品对草鱼等水产品样品进行净化,同时采用岛津液相色谱串联质谱LCMS-8050,岛津Shim-pack XR-ODSⅢ色谱柱进行分析,对草鱼中4种四环素类抗生素进行检测,结果表明:该方法回收率高、重现性好,可以满足草鱼等水产品中四环素类药物残留量的测定要求。
关键词:InertSep HLB Shim-pack XR-ODSⅢ 草鱼 四环素类
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-30A与LCMS-8050 联用系统;
色谱柱:Shim-pack XR-ODSⅢ(75×2.0 mm,1.6 μm;P/N:228-59922-92);
固相萃取小柱:InertSep HLB 60 mg/3 mL。
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器(P/N:380-00341-05);
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);

SHIMSEN Pipet移液枪:SHIMSEN Pipet PMII-10(P/N:380-00751-02);
SHIMSEN Pipet PMII-100(P/N:380-00751-04);
SHIMSEN Pipet PMII-1000(P/N:380-00751-06)。

1.2 分析条件
1.2.1 UHPLC 条件

色谱柱:Shim-pack XR-ODSⅢ(75×2.0 mm,1.6 μm;P/N:228-59922-92)
流 速:0.3 mL/min
进样量:1 μL
柱 温:35 ℃
流动相: A:0.2%甲酸水 B:乙腈
梯度洗脱程序如下:
草鱼中四环素类药物残留量的测定
1.2.2 质谱条件

离子化模式:ESI,正负离子同时扫描
碰撞气:氩气
雾化气:氮气 3 L/min
接口温度: 300℃
加热模块温度:400 ℃

扫描模式:多反应监测(MRM)
加热气:氮气 10 L/min
干燥气:氮气 10 L/min
DL温度:250 ℃
各化合物MRM参数见下表
草鱼中四环素类药物残留量的测定

1.3 样品前处理

1.3.1样品提取

 

精密称取草鱼样品2.0 g,加8 mL缓冲液*和2 mL 20 g/L乙酸铅,涡旋1 min,手动振摇5 min,8000 r/min离心10 min,取出上清液至25 mL容量瓶中,下层继续加8 mL、6 mL缓冲液*,按上述步骤提取2次,合并3次上清液,用缓冲液*定容至刻度,然后转移至50 mL离心管中,加10 mL正己烷,涡旋1 min,8000 r/min离心5 min,弃去正己烷层,精密量取12.5 mL(1.0 g样品)下清夜待净化。流程图见图1。
缓冲液*:称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)10.9 g、柠檬酸(C6H8O7·H2O)12.9 g、乙二胺四乙酸二钠盐37.2 g,用水溶解后稀释并定容至1000 mL,用NaOH调pH至4.0.

草鱼中四环素类药物残留量的测定
1.3.2样品净化

 

InertSep HLB 60 mg/3 mL

 

5 mL甲醇、5 mL水活化,弃去流出液;12.5 mL待净化液上样,弃去流出液;5 mL水、5 mL 5%甲醇水淋洗,弃去流出液;减压抽干小柱5 min;5 mL甲醇-乙酸乙酯(1:9)洗脱,收集流出液;将收集的洗脱液于35℃下氮吹至干,用甲醇-0.2%甲酸水溶液(2:8)定至1 mL,过0.22 μm微孔滤膜,供LC-MS/MS分析。 流程图见图2。

草鱼中四环素类药物残留量的测定

2. 结果及讨论

2.1 标准样品的MRM谱图

 

猪肉中多种兽药残留的同时测定
草鱼中四环素类药物的LC-MS/MS检测添加回收结果

 

将草鱼空白样品进行20.0 μg/kg浓度加标,平行4份样品考察回收率和RSD;并按上述相同方法采用W公司的HLB小柱对样品进行净化,平行3份样品考察回收率和RSD,具体结果如下:采用岛津InertSep HLB小柱对样品进行净化,样品加标回收率为76.60%-85.92%,RSD为1.95%-8.15%;采用W公司 HLB小柱对样品进行净化,样品加标回收率为72.56%-91.55%,RSD为1.97%-7.11%。
草鱼中四环素类药物残留量的测定

3. 结论

综上,本方案采用岛津InertSep HLB产品对草鱼等水产品样品进行净化,同时采用岛津液相色谱串联质谱 LCMS-8050,岛津Shim-pack XR-ODSⅢ色谱柱进行分析,对草鱼中4种四环素类抗生素进行检测;并和采用W公司 HLB小柱净化样品后的回收率及RSD进行对比,结果表明:该方法回收率高、重现性好,可以应对草鱼等水产品中四环素类药物残留量的测定要求;并且回收率及RSD与W公司 HLB小柱相当,InertSep HLB小柱能能完全替代W公司 HLB小柱对水产品中四环素类药物进行分析。

在线咨询

此项错误
此项错误
此项错误
点击获取验证码
此项错误