茶叶和大米中草甘膦及其代谢物的同时测定
2023年12月21日
摘要：建立了茶叶（绿茶） 和大米中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸（ AMPA）的测定方法。采用岛津的 SHIMSEN Styra MCX 固相萃取小柱对茶叶和大米进行净化， Shim-pack GISS-HP C18 (Metal free column)色 谱柱进行分离， 串联质谱检测分析。 对空白样品 50.0 μg/kg 浓度加标后， 按照上述前处理方法处理后上机， 平行 3 份样品考察回收率和 RSD， 结果显示， 茶叶（绿茶）中草甘膦加标回收率为 113.99%-120.69%， RSD 为 2.86%， AMPA 加标回收率为 101.75-107.03%， RSD 为 2.62%；大米中草甘膦加标回收率为 74.18-74.56%， RSD 为 0.28%， AMPA 加标回收率为 80.91-84.79%， RSD 为 2.59%。 该方法适用于茶叶和大米中草甘膦及 其代谢物的同时测定。
关键词：草甘膦 氨甲基膦酸 SHIMSEN Styra MCX 茶叶 LC-MSMS
1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材
仪器配置： Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统；
色谱柱：Shim-pack GISS-HP C18 (Metal free column) (3 μm， 150× 2.1 mm， P/N： 227-30924-03)；
固相萃取小柱：SHIMSEN Styra MCX 500mg/12mL 20EA (P/N： 380-00853-03)；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE 针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS 认证样品瓶 LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；
SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。
1.2 分析条件
UHPLC条件
色谱柱：Shim-pack GISS-HP C18 (Metal free column) (3 μm， 150× 2.1 mm， P/N： 227-30924-03)
流速：0.3 mL/min
进样量：5 μL
柱温：40 ℃
A： 5 mM 乙酸铵 B：乙腈
梯度洗脱程序如下：
质谱条件
离子化模式：ESI，正离子扫描
碰撞气：氩气
雾化气：氮气 3 L/min
接口温度：300℃
加热模块温度：400 ℃
扫描模式：多反应监测(MRM)
加热气：氮气 10 L/min
干燥气：氮气 10 L/min
DL温度：250 ℃
各化合物MRM参数见下表：
1.3 样品前处理
1.3.1 样品提取
称取样品 1.0 g，加 10 mL 水和 10 mL 二氯甲烷，手动振摇 1 min， 超声 20 min， 8000 rpm 下离心 3 min， 取 5 mL 上清液， 待净化。 流程图见下图 1。
1.3.2 样品净化
SHIMSEN Styra MCX 500mg/12mL
活化、平衡： 10 mL 甲醇、 10 mL 水，弃去流出液；
上样： 取 3 mL 待净化液上样， 弃去流出液；再取 2 mL 待净化液上样，收集流出液，混匀，待衍生。
流程图见下图 2。
1.3.3 样品衍生
取上述流出液 500 μL， 加 200 μL5%硼酸盐（Na2B4O7•10H2O） 溶液， 涡旋混匀 1 min， 加 300 μL 衍生 剂 9-芴基三氯甲烷（FMOC–Cl） 溶液（浓度为 1.0 mg/mL， 样品溶剂为乙腈）， 涡旋混匀 1 min， 室温 衍生过夜后，衍生液过 0.22 μm 微孔滤膜，进 LC-MS/MS 分析。 流程图见下图 2。
2. 结果及讨论
2.1 标准品的 MRM 色谱图
2.2 茶叶和大米中草甘膦及其代谢物 AMPA 的 LC-MS/MS 检测添加回收结果
对空白样品 50.0 μg/kg 浓度加标后， 按照上述前处理方法处理后上机， 平行 3 份样品考察回收率和RSD， 结果显示， 茶叶（绿茶）中草甘膦加标回收率为 113.99%-120.69%， RSD 为 2.86%， AMPA 加标回收率为 101.75-107.03%， RSD 为2.62%； 大米中草甘膦加标回收率为 74.18-74.56%， RSD 为 0.28%， AMPA 加标回收率为 80.91-84.79%， RSD 为 2.59%。
3. 结论
综上， 本方案采用岛津的 SHIMSEN Styra MCX 固相萃取小柱对茶叶和大米进行净化， Shim-pack GISSHP C18 (Metal free column)色谱柱进行分离， 串联质谱检测分析。 对空白样品 50.0 μg/kg 浓度加标后， 按照 上述前处理方法处理后上机，平行 3 份样品考察回收率和 RSD， 结果显示，茶叶（绿茶）中草甘膦加标回 收率为 113.99%-120.69%， RSD 为 2.86%， AMPA 加标回收率为 101.75-107.03%， RSD 为 2.62%；大米中 草甘膦加标回收率为 74.18-74.56%， RSD 为 0.28%， AMPA 加标回收率为 80.91-84.79%， RSD 为 2.59%。 该方法操作简单，回收率高，重复性好， 适用于茶叶和大米中草甘膦及其代谢物的同时测定