人参再造丸中马兜铃酸I的检测

摘要：本文建立了人参再造丸中马兜铃酸I的检测方法。参照《中成药中马兜铃酸控制研究指导原则》，采用岛津SHIMSEN Styra AAS固相萃取小柱对人参再造丸提取液进行净化，Shim-pack Velox C18色谱柱进行分离，采用岛津液相色谱-质谱联用仪LCMS-8060NX进行检测分析。对人参再造丸样品进行0.025mg/kg加标，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示，加标回收率为81.47%，RSD为0.57%，回收率高，重现性好，灵敏度高。该方法可为中成药中马兜铃酸的检测提供参考。
关键词：马兜铃酸I SHIMSEN Styra AAS Shim-pack Velox C18 人参再造丸 LC-MSMS

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-40B X3与LCMS-8060NX联用系统；
色谱柱：Shim-pack Velox C18（1.8μm，2.1×100 mm；P/N：227-32007-03）；
固相萃取小柱：SHIMSEN StyraAAS（60mg/3mL；P/N：380-00877-39）
纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱+取水器）；
SHIMSEN Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 分析条件

UHPLC条件
色谱柱：Shim-pack Velox C18（1.8μm，2.1×100 mm；P/N：227-32007-03） 流速：0.3 mL/min
进样量：1μL
柱温：30℃
流动相：A：0.1%甲酸（含1mmol/L乙酸铵）；B：乙腈
梯度程序如下：

质谱条件
离子化模式：ESI,正离子模式
碰撞气：氩气
雾化气：氮气3 L/min
接口温度：300℃
加热模块温度：400℃
扫描模式：多反应监测(MRM)
加热气：干燥空气10 L/min
干燥气：氮气10 L/min
DL温度：150℃
马兜铃酸I的MRM参数见下表

1.3 样品前处理

<1.3.1 样品提取

取装量差异项下的本品内容物适量，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，待净化。

<1.3.2 样品净化

SHIMSEN Styra AAS 60mg/3 mL

依次用5mL甲醇、5mL水活化，精密量取待净化液5mL上样，弃去流出液；依次用5mL水、5mL甲醇清洗，弃去流出液，抽干小柱；5mL15%甲酸乙腈溶液洗脱，收集洗脱液，加水定容至5mL，过0.22μm滤膜，供LC-MS/MS分析。净化流程图见图1。

2. 实验结果

2.1 标准品溶液的MRM色谱图

2.2 人参再造丸中马兜铃酸ILC-MS/MS检测添加回收结果

将人参再造丸样品进行0.025mg/kg加标，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示，加标回收率为81.47%，RSD为0.57%，回收率高，重现性好。回收率及RSD数据见下表：

3. 结论

本文建立了人参再造丸中马兜铃酸I的检测方法。参照《中成药中马兜铃酸控制研究指导原则》，采用岛津SHIMSEN Styra AAS固相萃取小柱对人参再造丸提取液进行净化，Shim-pack Velox C18色谱柱进行分离，采用岛津液相色谱-质谱联用仪LCMS-8060NX进行检测分析。对人参再造丸样品进行0.025mg/kg加标，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示，加标回收率为81.47%，RSD为0.57%回收率高，重现性好，灵敏度高。该方法可为中成药中马兜铃酸的检测提供参考。