缬沙坦胶囊中13种亚硝胺杂质的测定

摘要：本研究建立了缬沙坦胶囊中 13 种亚硝胺杂质的测定方法。采用岛津基毒专用柱 ShimNex S-GTIs 进行分离，岛津串联质谱 LCMS-8050 检测分析。结果显示，13 种亚硝胺杂质峰型良好，且 NDPA 和 NDIPA、NDBA 和 NDIBA、NDMA 和 DMF 的分离度均达到 1.5 以上。该方法可为缬沙坦胶囊中 13 种亚硝胺杂质的测定提供参考。
关键词：ShimNex S-GTIs 缬沙坦胶囊 13种亚硝胺杂质 LCMSMS

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统；
色谱柱：ShimNex S-GTIs（3 μm，4.6×150 mm；P/N：380-01247-31）；
Ghost Trap 鬼峰捕集柱（柱芯： P/N 228-59921-91；柱套：P/N 380-01259-99）；
纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱+取水器）；
SHIMSEN Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

Nichipet Air 移液枪：Nichipet Air 0.5-10 μL（P/N：00-NAR-10）；
Nichipet Air 10-100 μL（ P/N：00-NAR-100）；
Nichipet Air 100-1000 μL（P/N：00-NAR-1000）；
Nichipet Air 1000-10000 μL（P/N：00-NAR-100006）。

1.2 溶液的制备：

1.2.1 对照品溶液的制备：

分别准确称取 13 种亚硝胺杂质对照品适量，加水溶解并稀释至 1000 μg/mL，得到各杂质的单标溶液；分别取各杂质单标溶液适量，加水制成 1 ng/mL 的 13 种亚硝胺杂质混标溶液，备用。

1.2.2 供试品溶液的制备：

精密称取适量缬沙坦胶囊内容物，置于离心管中，加入 1.6 mL 甲醇，涡旋使溶解，超声 10 min，加6.4 mL 水，涡旋混匀，超声 10 min，6000 r/min 离心 5 min，取上清液过 0.22 μm 微孔滤膜，作为供试品溶液。最终浓度以 API 计为 10 mg/mL。

1.2.3 供试品加标溶液的制备：

精密称取适量样品，置于离心管中，加入含量为 0.1 mg/kg 的 13 种亚硝胺类物质混合对照品溶液，加入 1.6 mL 甲醇，涡旋使溶解，超声 10 min，加 6.4 mL 水，涡旋混匀，超声 10 min，6000 r/min 离心5min，取上清液过 0.22 μm 微孔滤膜，作为供试品加标溶液。最终浓度以 API 计为 10 mg/mL。

1.3 分析条件

UHPLC条件
色谱柱：ShimNex S-GTIs（3 μm，4.6×150 mm；P/N：380-01247-31）
流速：0.8mL/min
进样量：10 μL
柱温：60 ℃
切阀程序：0 min（MS）→ 17.6 min（废液）→ 18.4 min（MS）
流动相：A：0.1%甲酸水；B：0.1%甲酸甲醇
梯度程序如下：

质谱条件
离子化模式：APCI，正离子扫描
碰撞气：氩气
雾化气：氮气 3 L/min
接口温度： 350℃
加热模块温度：200 ℃
扫描模式：多反应监测 (MRM)
接口电压：4.5 kV
干燥气：氮气 5 L/min
DL 温度：150 ℃
各化合物 MRM 参数见下表

2. 实验结果

缬沙坦胶囊供试品溶液、13 种亚硝胺杂质混合对照品溶液色谱图如下：

为了避免高浓度的缬沙坦成品药物进入质谱，造成污染，实验中通过调整液相洗脱程序，实现 13种亚硝胺杂质与缬沙坦药物进行分离，通过二位流通阀，17.6~18.4 min 出峰时间内切入废液，18.4~30 min 切回质谱，进行质谱监控，由于不同色谱系统的延迟体积的差异，13 种亚硝胺杂质与缬沙坦的保留时间会发生变化，建议配置紫外检测器进行色谱图的监控。

3. 结论

本研究建立了缬沙坦胶囊中 13 种亚硝胺杂质的测定方法。采用岛津基毒专用柱 ShimNex S-GTIs进行分离，岛津串联质谱 LCMS-8050 检测分析。结果显示，13 种亚硝胺杂质峰型良好，且 NDPA 和NDIPA、NDBA 和 NDIBA、NDMA 和 DMF 的分离度均达到 1.5 以上。该方法可为缬沙坦胶囊中 13种亚硝胺杂质的测定提供参考。