蜂花粉中氯霉素的测定

摘要：本研究建立了蜂花粉中氯霉素的测定方法。采用岛津的 SHIMSEN Styra HLB 产品对蜂花粉样品进行净化，Shim-pack GIST C18-AQ 色谱柱进行分离，岛津串联质谱 LCMS-8050 检测，内标法定量分析。对空白样品加标后（添加浓度：0.15 μg/kg），按照上述前处理方法处理后上机，平行 3 份样品考察回收率和RSD，结果显示，加标回收率为 78.86%，RSD 为 6.51%，回收率高，重现性好。该方法可为蜂花粉中氯霉素的测定提供参考。
关键词：SHIMSEN Styra HLB 蜂花粉 氯霉素 LCMSMS

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统；
色谱柱：Shim-pack GIST C18-AQ（1.9 μm，2.1×100 mm；P/N：227-30807-02）；
纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱+取水器）；
固相萃取小柱：SHIMSEN Styra HLB（60 mg/3 mL；P/N：380-00855-03）；
SHIMSEN Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

Nichipet Air 移液枪：Nichipet Air 0.5-10 μL（P/N：00-NAR-10）；
Nichipet Air 10-100 μL（ P/N：00-NAR-100）；
Nichipet Air 100-1000 μL（P/N：00-NAR-1000）；
Nichipet Air 1000-10000 μL（P/N：00-NAR-100006）。

1.2 分析条件

UHPLC条件
色谱柱：Shim-pack GIST C18-AQ（1.9 μm，2.1×100 mm；P/N：227-30807-02）
流 速：0.3 mL/min 进样量：10 μL 温：40 ℃ 动相：A：水； B：甲醇
梯度程序如下：

质谱条件
离子化模式：ESI，负离子扫描
碰撞气：氩气
雾化气：氮气 3 L/min
接口温度： 300℃
加热模块温度：400 ℃
扫描模式：多反应监测 (MRM)
加热气：干燥空气 10 L/min
干燥气：氮气 10 L/min
DL 温度：250 ℃
各化合物 MRM 参数见下表

1.3 样品前处理

1.3.1 样品提取

取蜂花粉 2 g 于 50 mL 离心管中，加 150 μL 内标溶液（10 ppb）和 10 mL 乙腈，涡旋混匀 30 s，超声提取 10 min，于 8000 r/min 离心 3 min，取上清液 1 mL 于 15 mL 离心管中，再加 9 mL 水，摇匀，待净化。样品提取流程图见下图 1。

1.3.2 样品净化

SHIMSEN Styra HLB 60 mg/3 mL

3 mL 乙腈、3 mL 水活化，弃去流出液；待净化液上样，弃去流出液；3 mL10%乙腈水清洗，弃去流出液；1 mL 70%乙腈水洗脱，收集流出液，用 70%乙腈水定容至 1 mL，涡旋混匀，过 0.22 μm 滤膜，供 LC-MS/MS 分析。净化流程图见图 2。

2. 实验结果

2.1 混合标准品溶液的 MRM 色谱图

2.2 蜂花粉中氯霉素的 LC-MS/MS 检测添加回收结果

将蜂花粉空白样品进行 0.15 μg/kg 浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行 3 份样品考察回收率和 RSD，具体结果如下：加标回收率为 78.86%，RSD 为 6.51%。

3. 结论

本研究建立了蜂花粉中氯霉素的测定方法。采用岛津的 SHIMSEN Styra HLB 产品对蜂花粉样品进行净化，Shim-pack GIST C18-AQ 色谱柱进行分离，岛津串联质谱 LCMS-8050 检测，内标法定量分析。对空白样品加标后（添加浓度：0.15 μg/kg），按照上述前处理方法处理后上机，平行 3 份样品考察回收率和 RSD，结果显示，加标回收率为 78.86%，RSD 为 6.51%，回收率高，重现性好。该方法可为蜂花粉中氯霉素的测定提供参考。