猪肉中β-受体激动剂残留量的测定

摘要：参考国标GB 22286-2008，并对其方法进行优化，建立了猪肉中β-受体激动剂残留量的测定方法。采用岛津的WondaSep MCX固相萃取小柱对猪肉样品进行净化，Shim-pack GIST C18色谱柱进行分离，串联质谱检测分析，内标法定量。对空白样品0.5 μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示，0.5 μg/kg加标浓度的加标回收率为88.95%-96.77%，RSD为0.59%-11.80%，方法操作简单，回收率高，重现性好。该方法适用于猪肉中β-受体激动剂残留量的测定。
 

关键词：β-受体激动剂 猪肉 WondaSep MCX LC-MSMS
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

仪器配置：Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统；
色谱柱：Shim-pack GIST C18，50×2.1 mm，2 μm（P/N：227-30001-02）；
固相萃取小柱：WondaSep MCX 60 mg/3mL（P/N：5010-81931）；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 分析条件

      UHPLC 条件
      色谱柱：Shim-pack GIST C18，50×2.1 mm，2 μm（P/N：227-30001-02）
      流 速：0.3 mL/min
      进样量：5 μL
      柱 温：40 ℃
      流动相： A：0.1%甲酸水      B：甲醇

梯度洗脱程序如下：

质谱条件
离子化模式：ESI，正离子扫描
碰撞气：氩气
雾化气：氮气 3 L/min
接口温度：300℃
加热模块温度：400 ℃
扫描模式：多反应监测(MRM)
加热气：氮气 10 L/min
干燥气：氮气 10 L/min
DL温度：250 ℃

各化合物MRM参数见下表：

1.3 样品前处理

1.3.1样品提取

取2.0 g均质猪肉，加入20 μL 50 ng/ mL内标和8 mL 0.2 mol/L乙酸钠-乙酸缓冲液（pH=5.2），充分混匀，再加入50 μL β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶，混匀后，370C 水浴水解12 h。8000 r/min 离心2 min，取出上清液，下层继续加入8 mL 0.1mol/L高氯酸溶液，振荡提取2 min，8000 r/min 离心2 min，合并2次上清液，混匀，待净化。流程图见下图。

1.3.2 样品净化

       WondaSep MCX 60 mg/3 mL

3 mL甲醇、3 mL水活化；待净化液上样，弃去流出液；3 mL水、3 mL甲醇淋洗，弃去流出液；2.5 mL 5%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，400C氮吹至干，0.1%甲酸水溶液定容至1 mL，混匀，用0.22 μm有机滤膜过滤，供测定。流程图见下图。

2. 结果及讨论

2.1 标准品的MRM色谱图

2.2 猪肉中β-受体激动剂的LC-MS/MS检测添加回收结果

将猪肉空白样品进行0.5 μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，具体结果如下：0.5 μg/kg加标浓度的加标回收率为88.95%-96.77%，RSD为0.59%-11.80%。

3. 结论

本文参考国标GB 22286-2008，并对其方法进行优化，建立了猪肉中β-受体激动剂残留量的测定方法。采用岛津的WondaSep MCX固相萃取小柱对猪肉样品进行净化，Shim-pack GIST C18色谱柱进行分离，串联质谱检测分析，内标法定量。对空白样品0.5 μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示，0.5 μg/kg加标浓度的加标回收率为88.95%-96.77%，RSD为0.59%-11.80%，方法操作简单，回收率高，重现性好。该方法适用于猪肉中β-受体激动剂残留量的测定。