茶叶和大米中草甘膦及其代谢物的同时测定

摘要：建立了茶叶和大米中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸（AMPA）的测定方法。采用岛津的WondaSep Glyphosate固相萃取小柱对茶叶和大米进行净化，Shim-pack GISS-HP C18 (Metal free column)色谱柱进行分离，串联质谱检测分析。对空白样品50.0 μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示，大米中草甘膦加标回收率为85.2-89.5%，RSD为2.77%，AMPA加标回收率为64.6%-68.9%，RSD为3.24%；普洱茶中草甘膦加标回收率为101.3%-108.8%，RSD为3.81%，AMPA加标回收率为65.2%-70.8%，RSD为4.13%；龙井中草甘膦加标回收率为91.62%-96.83%，RSD为2.91%，AMPA加标回收率为72.11%-81.93%，RSD为6.45%。该方法适用于茶叶和大米中草甘膦及其代谢物的同时测定。
关键词：草甘膦 氨甲基膦酸 WondaSep Glyphosate 茶叶 LC-MSMS
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

仪器配置：Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统；
色谱柱：Shim-pack GISS-HP C18 (Metal free column) (3 μm，150×2.1 mm，P/N：227-30924-03)；
固相萃取小柱：WondaSep Glyphosate 500mg/6mL 30EA (P/N：5010-81938)；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 分析条件
UHPLC 条件

色谱柱：Shim-pack GISS-HP C18 (Metal free column) (3 μm，150×2.1 mm，P/N：227-30924-03)
流 速：0.3 mL/min
进样量：5 μL
柱 温：40 ℃
流 动 相：A：5 mM乙酸铵 B：乙腈
梯度洗脱程序如下：

质谱条件
离子化模式：ESI，正离子扫描
碰撞气：氩气
雾化气：氮气 3 L/min
接口温度： 300℃
加热模块温度：400 ℃

扫描模式：多反应监测(MRM)
加热气：氮气 10 L/min
干燥气：氮气 10 L/min
DL温度：250 ℃

各化合物MRM参数见下表

1.3 样品前处理

1.3.1 样品提取

称取样品1.0 g，加10 mL水，手动振摇1 min，静置浸泡1 小时，加3 mL二氯甲烷，手动振摇1 min，8000 rpm下离心2 min，取 3 mL上清液于15 mL离心管中，加0.9 mL乙腈，混匀，待净化。流程图见下图1。

1.3.2 样品净化

WondaSep Glyphosate 500mg/6mL
活化、平衡：5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液；减压抽干小柱5 min；
上样洗脱：待净化液上样，减压抽小柱至有液滴流出，卸真空，液滴自然滴落，收集流出液。
流程图见下图2。

1.3.3 样品衍生

取上述流出液780 μL，加200 μL5%硼酸盐（Na2B4O7•10H2O）溶液，涡旋混匀，加200 μL衍生剂9-芴基三氯甲烷（FMOC–Cl）溶液（浓度为1.0 mg/mL，样品溶剂为乙腈），涡旋混匀，室温衍生过夜后，衍生液过0.22 μm微孔滤膜，进LC-MS/MS分析。流程图见下图2。

2. 结果及讨论

2.1 标准品MRM色谱图

2.2 茶叶和大米中草甘膦及其代谢物AMPA的LC-MS/MS检测添加回收结果

对空白样品50.0 μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示，大米中草甘膦加标回收率为85.2-89.5%，RSD为2.77%，AMPA加标回收率为64.6%-68.9%，RSD为3.24%；普洱茶中草甘膦加标回收率为101.3%-108.8%，RSD为3.81%，AMPA加标回收率为65.2%-70.8%，RSD为4.13%；龙井中草甘膦加标回收率为91.62%-96.83%，RSD为2.91%，AMPA加标回收率为72.11%-81.93%，RSD为6.45%。

3. 结论

综上，本方案采用岛津的WondaSep Glyphosate固相萃取小柱对普洱茶、龙井、大米等样品进行净化，Shim-pack GISS-HP C18 (Metal free column)色谱柱进行分离，采用岛津串联质谱LCMS-8050检测分析，建立了茶叶和大米等样品中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸AMPA的同时检测方法，该方法操作简单、重现性好，适用于植物源性食品中草甘膦及其代谢物的同时测定。